elispot怎么用?3分钟教你快速上手!
今天又搞一天的Elispot,感觉自己跟那些小孔板较上劲!
我得把实验的流程整个捋顺。做这个之前,我心里也没底,就怕哪个环节出岔子。我把每一步要加啥、加多少,都仔仔细细地写在小卡片上。这样干起来就踏实多,不用老是翻看那厚厚的实验指南,心里有数,手上也麻利。
准备工作
先把那些个试剂准备最开始是包被抗体,我用PBS把那个Capture Antibody稀释一下,说明书上写的是1:200,我就按着这个比例来,用移液枪小心翼翼地加,生怕多加一滴或者少加一滴。稀释好,就往每个孔里加100微升。弄完这些,就把板子放4度冰箱里,让它们在那儿安安静静地待一晚上。
第二天,把板子从冰箱里拿出来,把里面的液体倒掉。然后,用封闭液洗一遍,每个孔加200微升,室温下放俩小时。这期间,我就去忙别的,比如准备细胞啥的。我得算好细胞的浓度,这样加到板子里才能保证每个孔里的细胞数量差不多。
关键步骤
这步挺关键的,我得把膜给弄湿。我记得清清楚楚,用的是70%的乙醇,每个孔加15微升,等大概半分钟。没弄湿的膜是白白的,弄湿就有点透明,这步可不能马虎,要不然,后面的实验就泡汤。
加细胞和培养
把细胞悬液小心翼翼地加到孔里,每个孔里加的量都一样。加完细胞,再把板子放回培养箱里。培养箱里的温度、湿度都得调跟平时养细胞一样。这期间,我就时不时地看看,生怕出啥问题。细胞在里面待着,就开始分泌我想测的那个东西。
显色
培养完,就得把细胞洗掉,然后加检测抗体,再加显色的东西。这几步都得按着说明书一步步来,时间、温度都得控制那些分泌东西的细胞就会在膜上留下一个个的小点点,就像小斑点一样。我得用专门的机器去数这些点点,数出来有多少个点点,就知道有多少个细胞分泌那个东西。
数点点
我打开电脑,找到那个叫AID elispot的软件,双击打开。等仪器启动好,我就把板子放进去,让机器自己去数。数完,软件会给出一个报告,上面清清楚楚地写着每个孔里有多少个点点。
3
整个实验做下来,感觉挺累的,但看到结果的时候,又觉得挺有成就感的。这Elispot实验,说难也不难,就是步骤多,每一步都得小心,不能出错。做多,也就熟练。下次再做,我就更有经验!