elispot怎么用？3分钟教你快速上手！

今天又搞一天的Elispot，感觉自己跟那些小孔板较上劲！

我得把实验的流程整个捋顺。做这个之前，我心里也没底，就怕哪个环节出岔子。我把每一步要加啥、加多少，都仔仔细细地写在小卡片上。这样干起来就踏实多，不用老是翻看那厚厚的实验指南，心里有数，手上也麻利。

准备工作

先把那些个试剂准备最开始是包被抗体，我用PBS把那个Capture Antibody稀释一下，说明书上写的是1:200，我就按着这个比例来，用移液枪小心翼翼地加，生怕多加一滴或者少加一滴。稀释好，就往每个孔里加100微升。弄完这些，就把板子放4度冰箱里，让它们在那儿安安静静地待一晚上。

第二天，把板子从冰箱里拿出来，把里面的液体倒掉。然后，用封闭液洗一遍，每个孔加200微升，室温下放俩小时。这期间，我就去忙别的，比如准备细胞啥的。我得算好细胞的浓度，这样加到板子里才能保证每个孔里的细胞数量差不多。

关键步骤

这步挺关键的，我得把膜给弄湿。我记得清清楚楚，用的是70%的乙醇，每个孔加15微升，等大概半分钟。没弄湿的膜是白白的，弄湿就有点透明，这步可不能马虎，要不然，后面的实验就泡汤。

加细胞和培养

把细胞悬液小心翼翼地加到孔里，每个孔里加的量都一样。加完细胞，再把板子放回培养箱里。培养箱里的温度、湿度都得调跟平时养细胞一样。这期间，我就时不时地看看，生怕出啥问题。细胞在里面待着，就开始分泌我想测的那个东西。

显色

培养完，就得把细胞洗掉，然后加检测抗体，再加显色的东西。这几步都得按着说明书一步步来，时间、温度都得控制那些分泌东西的细胞就会在膜上留下一个个的小点点，就像小斑点一样。我得用专门的机器去数这些点点，数出来有多少个点点，就知道有多少个细胞分泌那个东西。

• 把板子拿出来。
• 开始显色步骤。
• 把显色液滴进去。



• 注意看那些小点点。

数点点

我打开电脑，找到那个叫AID elispot的软件，双击打开。等仪器启动好，我就把板子放进去，让机器自己去数。数完，软件会给出一个报告，上面清清楚楚地写着每个孔里有多少个点点。

3

整个实验做下来，感觉挺累的，但看到结果的时候，又觉得挺有成就感的。这Elispot实验，说难也不难，就是步骤多，每一步都得小心，不能出错。做多，也就熟练。下次再做，我就更有经验！